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学者孔晓飞发表于2009-11-3 10:50:12
查看评论：1 │ 浏览：686 打印推荐给朋友

生活点滴

都是变异惹得祸

今天老板跟我聊我第二个课题，在第一个课题文章发表后一个星期，现在第二个课题开始收关，看看所有的数据，还是没有找到新的闪光点，又是一篇没有新意的文章。二个新的STAT1变异的病人，但是只不过是前面报道的一种亚型的延续，一个引起异常splicing的变异导致蛋白表达量下降到正常的30%，但是携带有变异的蛋白本身不存在功能上的异常，至少到现在为止，没有找到异常的证据，携带有变异的蛋白能够在干扰素刺激后磷酸化，磷酸化的蛋白能够顺利地进入细胞核，能够与诱导基因启动子的保守序列结合。因为蛋白表达量比正常低，所以磷酸化的蛋白和活化核转录因子都低于正常人。跟以前报道的STAT1 显性突变和隐性突变相比，低下的核转录因子是正常的50%左右，足以引起患者对分支杆菌易感。
由于这个变异处于coiled-coil区域，最近的文献报道，该区域与dimerization相关，并引起蛋白dephosporylation的问题，在病人细胞上第一次看到了一些让我觉得很好奇的dephosporylation的细胞表型， STAT1 phosporylation水平比正常要持续时间长，成纤维细胞在干扰素刺激后HLA-II高诱导表达，但是当我重复实验时，结果却是否定的，或者在正常对照中也能发现的，看看另外一种细胞类型，同样不存在明显的dephosporylation的问题，不存在活化的核转录因子在细胞核内聚集的问题，体外的转染实验也没有发现dimerization的问题。得出令人伤心的结论，这个变异与dimerization毫无关系。
本来以为这个病人存在dephosporylation的问题可以发表一篇大文章，但是一切随着dimerization不受影响而倒塌，今天老板跟我谈这篇文章的档次，我一下觉得自己好像接受不了，老板觉得课题已经走入了终点，这个变异构成不了一种新的概念，尽管我还想去试试其他的功能研究，但是我自己确实没有底。我怀疑这个变异是否影响STAT1与其他的蛋白的结合，但是现在没有这方面最直接的证据，这个变异是否影响STAT1的乙酰化，但是其他的研究中也没有发现这个位点乙酰化的证据，尽管wild-type 是一个理论上可以被乙酰化的位点。
这2个携带有纯合STAT1变异的患者，蛋白表达要明显高于另外2个携带有另一个纯合变异的病人，如果这2种表达量下降的变异蛋白都是正常功能的话，那么在临床症状上我发现的患者一定要比后2者临床症状轻，然而事实上问题完全相反，也就是说我的变异中还存在异常的东西，只不过现在还没有发现而已，当然老板的解释是，可能是因为不同的医疗水平，导致的临床结果不一样，但是我发现的2个病人中有一个已经死亡，另外一个也已经病入膏肓，脑炎和脑膜炎已经使病人头颅中到处是病灶，持续的癫痫，我相信他也活不长了。
我深信隐藏在下面的还有一些未知的东西，奇怪的是这个病人细胞在干扰素刺激之后，用microarray transcriptome去看的话，不存在明显的缺乏的东西。对，可能是剂量问题，我会再试试不同剂量下患者的反应。一度怀疑是否患者的细胞在干扰素刺激之后，产生更多的负性物质，但是我并没有证明干扰素诱导了患者细胞更多的凋亡，当然还存在我的一些可能出现的技术问题。
老板准备收工，但是我还没有准备好，我还想再找，再挖，我不知道该怎么办，因为我可能是徒劳，因为我自己也不知道在哪个方向去挖，老板可能也不希望我去浪费我的时间。尽管文章发不大了，发不好了，但是我已经努力了，要怪只能怪变异不好，我也只能用不以成败论英雄来安慰自己，想想自己还有可爱的儿子呢！！

本文引用地址： http://www.sciencenet.cn/m/user_content.aspx?id=267170

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[1] 标题：

发表评论人：[游客]hongbingj [2009-11-3 16:25:50] ip:202.127.20.*

加油,里面肯定有玄机.

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